Protocolo para esporulação de Pyricularia grisea, doença do trigo em condições de laboratorio. Fotoperiodo 12/12 a 25°C.

1. Protocolo de Esporulação do Fungo Fitopatogênico Pyricularia grisea em Meio
Sólido de Agar Aveia (AA)
Materiais Necessários:
1. Água destilada
2. Aveia (50 g)
3. Agar (15 g)
4. Balança de precisão
5. Recipiente para autoclavagem
6. Banho-maria
7. pHmetro e solução tampão para ajuste de pH
8. Papel de filtro ou gaze para coar
9. Autoclave
Procedimento:
1. Preparo do Meio de Cultura:
a. Meça 50 g de aveia utilizando a balança de precisão.
b. Adicione os 50 g de aveia a 500 ml de água em um recipiente adequado.
c. Coloque o recipiente em banho-maria por 0,5 horas, a 70° C, permitindo que a aveia
libere seus nutrientes no meio.
d. Misture bem a aveia e coe a mistura utilizando papel de filtro ou gaze para obter um
extrato líquido.
e. Complete com os outros 500 ml de água e adicione 15 g de agar ao extrato líquido de
aveia.
f. Ajuste o pH do meio para 7 utilizando um pHmetro e solução tampão.
2. Autoclavação:
a. Transfira o meio de cultura para um recipiente adequado para autoclavagem.
b. Autoclave o meio a 127°C por 20 minutos para esterilização.
3. Inoculação do Fungo:
a. Após a autoclavagem, permita que o meio de cultura esfrie até uma temperatura que
seja suportável ao toque.
b. Inocule o Pyricularia grisea previamente cultivado em meio líquido no centro da
placa utilizando uma alça de inoculação estéril.
c. Espalhe uniformemente o inóculo na superfície do meio de cultura.
4. Incubação:
a. Incube as placas a uma temperatura adequada para o crescimento do Pyricularia
grisea, geralmente em torno de 25-28°C.
b. Monitore o crescimento do fungo e observe o desenvolvimento das estruturas de
esporulação.
5. Colheita das Esporos:
a. Quando as estruturas de esporulação estiverem visíveis, colha os esporos utilizando
uma alça de inoculação estéril.
b. Transfira os esporos colhidos para um meio de armazenamento apropriado para
futuras utilizações.
6. Armazenamento:
a. Armazene os esporos em condições adequadas para preservar sua viabilidade, como
em uma geladeira ou freezer.
Lembre-se de adotar práticas assépticas ao longo de todo o procedimento para evitar
contaminações indesejadas. Este protocolo fornece as orientações básicas para a
esporulação do *Pyricularia grisea* em meio sólido de Agar Aveia (AA).