Tipos de pruebas y conceptos relacionados

1. DRA. MANUELA LUJAN VELASQUEZ
REACCIONES SEROLOGICAS
Ag- Ac.

2.  Las reacciones Ag-Ac presentan dos
estadios:
 1.- Reconocimiento y unión Ag-Ac
(la reacción primaria).
 2.- Interacción Ag-Ac tras la formación del
inmunocomplejo (reacción secundaria).

3. RECONOCIMIENTO ANTIGENO-
ANTICUERPO
 La unión Ag-Ac es una interacción reversible en la
que sólo intervienen enlaces no-covalentes entre
el epítopo del Ag y las CDRs de la pareja VH-VL del
Ac.
 Fuerzas implicadas en la unión Ag-Ac
 Los enlaces no covalentes son dependientes de la
inversa de la distancia entre los grupos químicos
implicados.
 Puentes de hidrógeno
 Fuerzas electrostáticas (enlaces iónicos)
 Fuerzas de van der Waals
 Enlaces hidrófobos

4. Estabilidad de la reacción Ag - Ac
1. Afinidad
 Es la fuerza de unión entre un anticuerpo y
un único determinante antigénico
 Esta dada por la suma de las fuerzas de los
enlaces que intervienen en dicha unión
 Es una expresión de la atracción existente
entre las moléculas del Ag y del Ac

5. 2. Avidez
 Los anticuerpos son multivalentes (al menos dos
sitios de unión) con el Ag.
 Los Ags también son multivalentes
 La fuerza con la que un Ac multivalente se une a
un Ag multivalente se conoce como avidez
 La fuerza total de esta unión es significativamente
mayor que la suma de las afinidades existentes
en cada uno de los sitios de unión

6. CARACTERISTICAS DE LA
INTERACCION Ag-Ac.
 ESPECIFICA
 REVERSIBLE
 DEPENDIENTE DEL pH
 SENSIBLE A LA TEMPERATURA
 SENSIBLE A LA FUERZA IONICA.

7. Especificidad
 Cuando un Ac solo es capaz de reaccionar contra un
Ag
 Muchas veces varios Ags pueden compartir uno o
mas determinantes antigénicos idénticos o similares
 En este caso, un mismo Ac puede reaccionar con
todos los Ags y se dice que su especificidad es baja =
reacción cruzada

8.  DEFINICION
 Es un acúmulo de
reacción Ag-Ac
 In vitro
 Resultado de la
agregación de m’os o
células
 Rx. Visible
AGLUTINACION

9. Condiciones óptimas
 1. Presencia de
electrolitos
 2. pH
 Temperatura
 Prozona.
AGLUTINACION
ANTIGENO (Ag)
 Forme, particulado
 Ejm. Células,
partícula de látex

10.  AGLUTINACION CUALITATIVA
 En lámina
 Consiste en mezclar Ag y Ac y observar
la aglutinación.
 Si la prueba es positiva es determinante
pero el resultado negativo no.
 Ejemplos
 Prueba de aglutinación rápida para la
brucelosis, test de determinación de
grupos sanguíneos, test de Coombs para
la anemia hemolítica autoinmune,
AGLUTINACIÓN: TIPOS

11.  TEST DE AGLUTINACIÓN
CUANTITATIVA:
 En tubo
 Para la “titulación” de un
suero: se diluye el suero y se
enfrenta a una cantidad fija
de Ag.
 TITULO de Ac: corresponde
a la máxima dilución del
suero en el que la
aglutinación es positiva
AGLUTINACIÓN: TIPOS

12. AGLUTINACIÓN: TIPOS
 DIRECTA
 Ag forma parte de la célula
(GR, bacteria)
 EJM.
 Dx de tifoidea, brucelosis
 Determinación de serotipos
o variedades bacterianos
 Determinación de grupos
sanguíneos.
 INDIRECTA O PASIVA
A) A. pasiva o indirecta
 Ag es soluble
 Ag se adsorbe a partículas
inertes (látex, bentonita) o a
células (GR).
 Se busca Ac.
 A. pasiva reversa
 Ac. Se adsorbe a látex
 Se busca Ag.

13. AGLUTINACION DIRECTA

14. A. pasiva o indirecta

19. INHIBICION DE LA
HEMAGLUTINACION

21. Rx entre Ag soluble y su Ac homólogo
Se manifiesta por la formación de un
pptado visible en la interfase de los
reactivos
Zona de equivalencia.
PRECIPITACION

22. A. Inmunoprecipitación en medio líquido:
• La prueba del anillo
B. inmunoprecipitación en medio sólido:
B.1. Inmunodifusión
 Inmunodifusión simple
 Inmunodifusión doble
B.2. Inmunoelectroforesis
PRECIPITACION: TIPOS

23.  Prueba del anillo:
 Solución del Ag se coloca en un tubo con
solución de suero (Ac)
 Ambos difunden hasta alcanzar las
concentraciones óptimas.
INMUNODIFUSION EN MEDIO LIQUIDO

24.  Utiliza un soporte de agar noble
 Difunden el Ag y Ac.
Inmunodifusión simple :
 Oudin
 Se establece un gradiente de
concentración sólo para uno de los
reactivos
 Sólo uno de ellos difunde
INMUNODIFUSION EN MEDIO SOLIDO

25. Inmunodifusión
doble:
Ouchterlony
Ag y Ac difunden
Las bandas o líneas de
precipitación aparecen
entre los dos pocillos.
INMUNODIFUSION EN MEDIO SOLIDO

26. • Ouchterlony describió la técnica por
primera vez en 1949.
• Placa Petri con agar
• Pocillos con Ag y Ac
• Bandas de precipitación
• Diagnostico de rabia

28. Se utiliza para el análisis
cualitativo de mezclas de Ag.
Inmunoelectroforesis

29. FIJACION DEL COMPLEMENTO
-Se produce en dos fases:
1. Rx Ag – AC
2. Se añaden GR + AC
1. 2.

30.  PRINCIPIO :
 Utilización de un Ac. o Ag marcado con
una enzima para detectar una reacción
antígeno – anticuerpo
 La enzima actúa sobre un sustrato
generando un producto coloreado
medible.
 Enz: Peroxidasa, fosfatasa
ENSAYOS DE INMUNOADSORCION
ENZIMATICA : ELISA

31. ELISA: Fases

33.  PROCEDIMIENTOS GENERALES DE
UNA TÉCNICA ELISA:
 Dispensar muestras
 Dispensar conjugado
 Incubar a 37ºC o a temperatura ambiente
 Lavar los pozos
 Dispensar cromógeno/sustrato
 Incubar a 37ºC o a temperatura ambiente
 Dispensar solución de parada
 Leer en lector de tiras ó placas de ELISA

35.  ELISA DIRECTO
 Detectar Ag
 Utiliza anticuerpo
marcado
TIPOS DE ELISA

36. TIPOS DE ELISA
 ELISA INDIRECTO
 Para detectar Ac.
 Utiliza Anti-anticuerpo
marcado

37.  ELISA SANDWICH
 Detecta Ag o Ac.
TIPOS DE ELISA

38.  ELISA COMPETITIVO
 El Ac o Ag de la muestra va a
competir con el conjugado por
un número limitado de sitios
de unión del antígeno.
 Habrá ausencia de color en
una muestra positiva debido a
que el sustrato no encontrará
a la enzima porque el
conjugado ha sido desplazado
por el anticuerpo presente en
la muestra.
TIPOS DE ELISA

39.  PRINCIPIO:
 Emplea Ac. Conjugados a colorantes
fluorescentes (fluorocromo)
 Detecta Ag. o Ac.
 Isotiocianato de fluoresceína, rodamina B de
lisamina o ácido 1-dimetilaminonaftalen-5-
sulfónico
 Utiliza microscopio de fluorescencia
INMUNOFLUORESCENCIA

40. TIPOS DE
INMUNOFLUORESCENCIA
 DIRECTA (IFD)
 Detecta Ag.
 Utiliza Ac. marcado
 Virus respiratorio sincitial
Virus Dengue

41.  INDIRECTA (IFI)
 Detecta Ac.
 Utiliza Anti-Ac.
marcado
TIPOS DE INMUNOFLUORESCENCIA

43.  Es una técnica inmunológica utilizada para la
cuantificación de antígenos (Ag) o Anticuerpos (Ac) en
una muestra problema.
 Se utilizan antígenos o anticuerpos marcados con
radioisótopos, entre los mas utilizados son tritio
(³H),Carbono (14C), Yodo (125I).
 El fundamento de esta técnica es la reacción antígeno-
anticuerpo; y la cuantificación de la radiación emitida
por el isotopo en el antígeno que no reacciona en el
caso de el radioinmunoanálisis directo o bien la
radiación emitida desde el anticuerpo, que ha
reaccionado en el radioinmunoanálisis indirecto.
RADIOINMUNOENSAYO

46. APLICACIONES.-
 Se emplea en la detección de Ag o Ac en
las muestras biológicas utilizando
radiactividad.
 Es una de las técnicas mas utilizadas por
cuantificar variedad de moléculas:
 Proteínas: inmunoglobulinas, IgE
determina alergias; Hormonas peptídicas,
neuropéptidos, transferrinas

47. APLICACIONES.-
 Antígenos víricos: virus de la hepatitis B, VIH
 Hormonas: Insulina, secretina
 Hormonas esteroideas: testosterona, cortisol
 Prostaglandinas
 Vitaminas
 Medicamentos: antiepilépticos, antibióticos,
antidepresivos , tranquilizantes, esteroides anabólicos.
 Histología, detección de tumores, inmunorradioterapia,
posibilidad de irradiación de células neoplásicas.

48. WESTERNBLOT

49. WESTERNBLOT para VIH

50. Western blot
3. Reacción antígeno:anticuerpo

51. Western blot: Lectura de resultados
Hidatidosis Fasciolosis

52. Cisticercosis
- Cistiblot®
HIV

53. INMUNOCROMATOGRAFIA
 La inmunocromatografía es una técnica inmunológica que permite
visualizar la reacción antígeno-anticuerpo por la acumulación del
oro coloidal del conjugado en zonas específicas del papel de
nitrocelulosa donde se fijan previamente anticuerpos de captura.
 Se basa en la migración de una muestra a través de una
membrana de nitrocelulosa. La muestra es añadida en la zona del
conjugado, el cual está formado por un anticuerpo especifico
contra uno de los epítopos del antígeno a detectar y un reactivo
de detección.
 En la actualidad, esta técnica (pruebas o test rápidos) se viene
utilizando para el diagnóstico rápido de varias enfermedades, a
través de la detección de antígenos en diversos líquidos
biológicos, tales como en infecciones por virus de la hepatitis,
malaria, COVID-19, sífilis, Dengue, PSA, etc