Presentacion de la explicación basica de el Inmunoensayo ELISA y sus tipos basicos.

1. Análisis de
inmunoadsorción
ligada
a enzimas (ELISA)

2. Integrantes:
Ludwig Jael Nava Sarmiento
Emily Valeria Pérez George
Sean Khaery Javier Chavarría
Oliver Maxim Hernández Nava

3. Pregunta de introducción
• ¿Qué diferencia hay entre un anticuerpo (Ac) y un
antígeno (Ag) ?

4. Introducción
Técnica de laboratorio que usa anticuerpos ligados a enzimas
a fin de detectar y medir la cantidad de un antígeno o
anticuerpo presente un una muestra
La técnica se basa en el principio de la reacción antígeno-
anticuerpo
La prueba se hace usando una superficie sólida a la que los
anticuerpos y otras moléculas se adhieren
En la etapa final, se produce una reacción enzimática que
causa un cambio de color que puede leerse por
espectrofotometría.

5. OBJETIVO
El test ELISA es una prueba, que en el
análisis clínico se usa frecuentemente
para detectar y medir distintos
biomarcadores principalmente en la
sangre. Puede ser usada para detectar
desde anticuerpos, hormonas y enzimas
hasta virus y bacterias.

6. FUNDAMENTOS
• El test ELISA detecta la presencia de antígenos o
anticuerpos específicos en muestras biológicas.
• Se basa en la interacción entre un anticuerpo y un
antígeno, que es detectada mediante la adición de
una enzima y un sustrato que produce una señal
visual o cuantificable.

7. TIPOS DE ELISA
1.ELISA directo (dELISA)
2.ELISA indirecto (iELISA)
3.ELISA de captura (Sandwich ELISA)
4.ELISA de competición (cELISA)

8. Es el mas simple y rápido de
hacer, donde un Anticuerpo
primario marcado con una
enzima se unirá
directamente al Antígeno de
interés permitiendo la
detección y/o la
cuantificación del mismo.
Directo

9. EQUIPO A UTILIZAR
Placas de microtitulación: Son placas de plástico o vidrio
que tienen múltiples pocillos o wells en los que se realizan
las reacciones químicas del ELISA.
Antígeno o anticuerpo de interés: Este es el material
biológico que se va a detectar en la muestra. Puede ser un
antígeno (proteína, virus, bacterias, etc.) si se realiza un
ELISA indirecto o directo, o un anticuerpo si se realiza un
ELISA competitivo.

10. EQUIPO A UTILIZAR
Soluciones de bloqueo: Se utilizan para bloquear los sitios no
ocupados de la placa de microtitulación y evitar la unión
inespecífica de las muestras o reactivos. Pueden ser soluciones
que contienen proteínas como albúmina de suero bovino (BSA,
por sus siglas en inglés), leche en polvo, gelatina, etc.
Soluciones de lavado: Se utilizan para lavar los pocillos de la
placa de microtitulación entre cada paso del ELISA, con el fin de
eliminar los reactivos no unidos y reducir el ruido de fondo. Por lo
general, son soluciones salinas tamponadas, como solución
salina tamponada con fosfato (PBS, por sus siglas en inglés).

11. EQUIPO A UTILIZAR
Soluciones de conjugado: Se utilizan para marcar el anticuerpo o
antígeno secundario con una enzima, como la peroxidasa de rábano
picante (HRP, por sus siglas en inglés) o la fosfatasa alcalina (AP, por
sus siglas en inglés), que permitirá la detección del antígeno o
anticuerpo de interés.
Reactivos de sustrato: Son sustratos cromogénicos o fluorogénicos
que, al interactuar con la enzima conjugada, producen un cambio de
color o emiten fluorescencia que puede ser medido y cuantificado.
Ejemplos comunes de reactivos de sustrato son la tetrametilbenzidina
(TMB) o el 4-metilumbeliferil fosfato (4-MUP).

12. EQUIPO A UTILIZAR
Soluciones de parada: Se utilizan para
detener la reacción enzimática después de la
adición del sustrato, interrumpiendo la
generación de señal. Pueden ser soluciones
ácidas, como ácido sulfúrico o ácido
clorhídrico diluido.
Soluciones de lavado final: Se utilizan para
lavar los pocillos de la placa de
microtitulación después de la adición del
sustrato y la solución de par.
Espectrofotómetro

13. Explicación del procedimiento.
Una placa con el
antígeno (el antígeno se
Inmoviliza sobre una
placa) del anticuerpo que
se está
estudiando se expone al
suero del paciente;
cualquier
anticuerpo apropiado
presente en el suero se
unirá al
antígeno de la placa.
Es el antígeno
que se desea
detectar en la
muestra.
Anticuerpo
que se ha
unido a una
enzima.

14. Explicación del procedimiento
Se añade la enzima
usada para catalizar la
producción
del producto coloreado
(que está unida de
forma
covalente a un
anticuerpo que es
específico).
Es el antígeno
que se desea
detectar en la
muestra.
Anticuerpo
que se ha
unido a una
enzima.
Sustrato

15. Explicación del procedimiento
Entonces se
añade el sustrato
de la enzima y se
produce
el cambio de color.
Es el antígeno
que se desea
detectar en la
muestra.
Anticuerpo
que se ha
unido a una
enzima.
La enzima unida
al anticuerpo
detecta el
sustrato y lo
convierte en un
producto visible.
Todos estos pasos se
incuban durante un período
constante y se lava
cualquier exceso antes de
añadir la siguiente
sustancia.

16. Ejemplo del procedimiento

17. Pregunta
• ¿Por qué en el video, el antígeno dos (el que estaba hacia la
derecha) fue negativo?

18. Dicho en palabras mas sencillas…
Anticuerpo
Fijado a una fase
Solida.
Suero
Si contiene anticuerpos
específicos, se unen al
antígeno
Anticuerpo marcado
con enzima
Se une a los anticuerpos
específicos en la
muestra.
Sustrato de la
enzima
Produce un cambio de
color si la enzima está
presente y activa.
Resultado
del ELISA
directo

19. Indirecto
Es un ensayo parecido al ELISA
directo, pero en dos pasos, lo que
permite amplificar la señal
obtenida . En este caso se utilizan
dos anticuerpos, uno primario y
otro secundario, y es este ultimo
el que ira conjugando a una
enzima

20. Sandwich
En el ELISA tipo sándwich
el antígeno queda
inmovilizado entre dos
anticuerpos, uno de
captura y otro de
detección, que se unirán
a dos epítopos distintos
de un mismo antígeno.

21. Competitivo
El ELISA competitivo es una
variante más compleja de la
técnica ELISA, también conocido
como ELISA de inhibición debido
al uso de un antígeno de
referencia que competirá con el
antígeno de la muestra por
unirse al anticuerpo primario.
Se utiliza para detectar bajas
concentraciones de antígeno.

22. Como se reporta el resultado
•Paso 1: Preparación de las muestras de calibración: Se preparan
muestras con concentraciones conocidas del antígeno o anticuerpo
de interés.
•Paso 2: Medición de la absorbancia: Se realiza la reacción de ELISA
en la placa de microtitulación y se mide la absorbancia de las
soluciones de reactivo de sustrato en los pocillos de la placa con un
espectrofotómetro.

23. Como se reporta el resultado
•Paso 3: Construcción de la curva de calibración: Se grafican los
valores de absorbancia versus las concentraciones conocidas de las
muestras de calibración para obtener una curva de calibración.
•Paso 4: Extrapolación y cálculo de la concentración desconocida: Se
utiliza la curva de calibración para determinar la concentración del
antígeno o anticuerpo en las muestras desconocidas, extrapolando
los datos de absorbancia y obteniendo la concentración
correspondiente.

24. Como se reporta el resultado

25. Usos clinicos del ELISA directo: VIH
El ELISA es especialmente útil en la detección de
enfermedades infecciosas, como VIH.
La detección sistemática de la infección por VIH se realiza
empleando un análisis de inmunoadsorción ligada a
enzimas (ELISA) para detectar los anticuerpos contra el VIH.
Si el ELISA es positivo hay que realizar pruebas de
confirmación, por ejemplo una inmunotransferencia
(Western blot), que detecta los anticuerpos contra
proteínas específicas del VIH.

26. Otros usos clínicos
Tienen aplicación universal para la determinación o
cuantificación de:
• Fármacos terapéuticos y no terapéuticos
• Puede utilizar diversas sustancias biológicas
• Puede detectar sustancias infecciosas (bacterias, virus o
parásitos), hormonas, o anticuerpos de respuesta del
huésped en el suero, en la orina, en el líquido
cefalorraquídeo en saliva y en cualquier líquido biológico
donde se encuentre la sustancia a investigar.

27. • Enfermedades producidas por parásitos
Toxoplasmosis, Triquinosis, Trinanosomas, etc.
• Enfermedades producidas por Micoplasmas
• Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos,
Salmonelas.
• Enfermedades producidas por virus
Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis
vírica, Leucemia felina.
• Otras aplicaciones
Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona...)Cuantificación de
inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA) Inmunopatología (Ac anti-DNA,
Factor reumatoide,I nmunocomplejos circulantes)

28. Importancia
• En estudios serológicos, hematológicos,
endocrinológicos, oncológicos, en los transplantes, la
medicina forense y la antropología.
• Con propósitos médicos se han aplicado
determinación de hormonas y proteínas plasmáticas,
antígenos tumorales, drogas, Ag y Ac de
microorganismos (parásitos, hongos, bacterias, virus)
• Los resultados aportan elementos diagnósticos,
información de una enfermedad y coadyudan en la
planificación del tratamiento

29. VENTAJAS
-Prueba muy sensible
-Muy especifica
-Simple
-Rápida
-Se puede trabajar un gran
numero de muestras
DESVENTAJAS
-Mayor fallas por
errores humanos
Ventajas y desventajas

30. Conclusión
La técnica de ELISA se basa en la especificad de los
anticuerpos para unirse a antígenos de forma que podemos
detectar y cuantificar proteínas solubles de una muestra.
Los test ELISA fueron desarrollados originalmente para la
medición de Ac, pero también se ha adaptado para detectar
con éxito muestras que contienen Ag por lo que sirve o son
una herramienta para el diagnostico de enfermedades por
microorganismos

31. Preguntas finales
• ¿Cuántos tipos de ELISA hay (con sus nombres)?

32. Preguntas finales
• ¿Qué entendiste del tema?

33. Bibliografía
• https://medlineplus.gov/spanish/ency/article/003332.htm
• https://www.cqssalud.com/que-son-los-test-elisa/
• https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-ampliado/tecnica-elisa-
generalidades#:~:text=La%20t%C3%A9cnica%20ELISA%20(%22Enzyme%2D,un%20colorante%2C%2
0puede%20ser%20medido
• https://es.slideshare.net/AnclesPerez/elisa-completo
• https://www.3tres3.com/articulos/elisa-como-herramienta-de-diagnostico-1-2-principios-
basicos_48314/
• https://es.moleculardevices.com/applications/enzyme-linked-immunosorbent-assay-
elisa#:~:text=Paso%201%3A%20El%20anticuerpo%20de,solo%20el%20ant%C3%ADgeno%20de%20in
ter%C3%A9s.
• https://www.3tres3.com/latam/articulos/elisa-como-herramienta-de-diagnostico-1-2-
principios-basicos_14334/
• https://www.abyntek.com/elisa-tipo-sandwich/
• https://theory.labster.com/types-elisa-es/
• https://gentaur.es/conocimiento/test-elisa